最常見的檢測新型冠狀病毒特異性核酸序列的方法是熒光定量PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))。 由于新型冠狀病毒是RNA病毒,試劑盒檢測基本都采用反轉(zhuǎn)錄加實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR),擴(kuò)增病原體的核酸 (RNA) ,同時(shí)通過熒光探針實(shí)時(shí)檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。 在PCR反應(yīng)體系中,包含一對(duì)特異性引物以及一個(gè)Taqman探針,該探針為一段特異性寡核苷酸序列,兩端分別標(biāo)記了報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)。 探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;如反應(yīng)體系存在靶序列,PCR反應(yīng)時(shí)探針與模板結(jié)合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解,報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,發(fā)出熒光。 每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子產(chǎn)生。